尼康A1共聚焦培训指引
1、尼康尼康A1共聚焦培训指引1尼康A1共聚焦培训指引1开机顺序显微镜部分（1）接通电动载物台电源（2）接通卤素灯（目视透射光观察用灯）电源（3）接通水银灯（目视荧光观察用灯）电源（4）接通显微镜主体电源共聚焦部分（5）接通激光台的聚焦电源（随配置不同各异）（6）接通共聚焦控制器电源计算机部分（7）开启计算机与显示器（8）启动 NlS-Elements"软件关机顺序与以上相反！2显微镜操作2.1认识显微镜各个部件尼康A1共聚焦培训指引#尼康A1共聚焦培训指引2显微镜主题示意图：（1）滤光片：“D'毛玻璃，培训“ NCB色温平衡片，指引“ GIF”红外滤光片，尼康用于 PFS（2）视场光阑；（3）聚光
2、聚焦器升降旋钮；（4）起偏器（DIC用）；（5）聚光器对中旋钮；（6）孔径光阑；（7）聚光器模块（包括明视场，培训DIC）；（8）滤色块转盘（包括 DIC检偏片）；（9）手动荧光光闸；（10）电动焦距调节旋钮；（11）ND减光片；（12）遥控器；（13）透射光电源；（14）汞灯荧光光源；（15）HUB控制器尼康A1共聚焦培训指引3尼康A1共聚焦培训指引#2.2显微镜本机操作前面板控制1) 状态显示屏；2) PFS开关按钮；3) 光路端口切换按钮;4) 中间变倍旋纽；尼康A1共聚焦培训指引#侧面板控制1) 调焦旋钮2) 粗微调切换按钮3) 物镜切换按钮；4) 滤光块，指引DIC检偏 器切换按钮5) 透射光光
3、尼康源开关 (当遥控器透射光源控制按钮打开时，聚焦此按钮无效)；6) 透射光量度调节旋钮(当遥控器透射光源控制按钮打开时，培训此旋按钮无效)；7) 物镜复位8) 物镜向下移动2毫米电动载物台控制尼康A1共聚焦培训指引#尼康A1共聚焦培训指引4移动模式开关/指示灯XY 速度 Coarse/ Fine/ExFine 指示灯调焦速度 Coarse/ Fine/ ExFine 切换按钮调焦手轮摇杆XY移动速度切换开关注意：在使用显微镜之前，指引要把主机底座右后端的尼康黑色HUB控制器(显微镜示尼康A1共聚焦培训指引#意图15位置)右侧的电源开关打开尼康A1共聚焦培训指引32.3遥控器操作5)PFS ON/OFF聚光器转盘
4、切换按钮6)979)长寿命汞灯遥控器SHUTTEF按钮ND指示灯ND切换按钮2.4软件操作显微镜控制面板物镜切换光路切换PFS控 制Z轴调节明场照明控制荧光光闸荧光照明强度聚光镜切换滤光块切换节3)4)1)2)7)8)透射光源控制按钮 荧光光强控制 荧光光闸DIC检偏器快速切换按钮 光路端口切换按钮2 _镜切换按钮滤光块，聚焦DIC检偏器切换按 钮面板调出方式：软件灰色空白处鼠标右键菜单选择Acquisition Controls -> Ti PadPfSOp MernofyDflwii Bl0DSCPt; KO 丘TiPfid kN»cfiei:eLight PdithE1QON
5、培训DtQmraLFftcrsFur-etl 世雷IjBKNi -T lfeeR«iptControlMEMCMTLE100Phh FTIDOx/1.40PFS Oil i%尼康A1共聚焦培训指引7载物台控制面板XY移动XY精确移动Z轴精确移动界面调出方式：软件灰色空白处鼠标右键菜单选择Acquisition Controls -> XYZ Navigationz轴调节XY粗微调切整视野移动尼康A1共聚焦培训指引#尼康A1共聚焦培训指引8“ oc勺使用使用OC (Optical Configurations )快捷控制显微镜状态。!叩 1 'r : DIA DAPI FTT
6、C TC1TC Confbcai（随显微镜设置不同，具体 OC名称与功能细节以工程师说明为准）3显微镜观察方法3.1明视场透射光操作要点2）打开电源开关，并打开显微镜透射光卤素灯电源开关；3）把滤色块移到空位；4）把起偏器，检偏器移岀光路；5）把聚光器转盘切换到 A状态；6） 检查柯勒照明（柯勒照明调节方法参看附录1）；7）检查岀光端口。3.2微分干涉（Die）操作要点8）按照明视场透射光观察方法调节好显微镜；9） 确认所使用的物镜上插有DIC插片（slider）；10）把起偏器，检偏器移入光路；11） 按照相对应物镜将聚光器镜转盘转到相应N1/N2位置（请参见另外所附对 照表）；12）检查岀
7、光端口；13）旋转起偏器，选择最佳显示效果。3.3荧光观察操作要点14）打开荧光电源稍待片刻至光源指示灯不闪；15）确认透射光开关处于关闭状态；16）检查岀光端口；17）选择合适的滤色块；18） 打开光闸（长寿命汞灯遥控器上按钮），调节荧光亮度，进行观察;19）不观察时，把光闸关掉，以避免荧光淬灭。3.4完美聚焦系统（PFS操作方法二向色镜插拔拨杆（1）确认二向色镜插拔拨杆为IN状态。（2）将要使用的物镜放入光路中，使用显微 镜的调焦手轮进行调焦，使焦点与样本 重合。（3）按下操作面板的 PFS ON/OFF按钮。（PFS的动作开始后，PFS ON/OFF按钮 绿色亮灯）（4）操作PFS移置控
8、制器，将焦点与需要进行焦点保持的位置重合，开始观察。PFS的动作开始后，无法通过显微镜主体的调焦手轮进行对焦操作。偏移量的登录：按下偏移量记忆按钮，可以登录使用偏移旋钮调节的焦点位置偏移量的再现：按下调用按钮，可以调用已登录的焦点位置图Ti-E正面操作面板与移置控制器尼康A1共聚焦培训指引10附录：（一）柯勒照明的调节方法1）选择io 物镜；2）调焦，使标本清晰成像；3） 缩小视场光阑（显微镜视图2位置）；4） 上下调节聚光器（显微镜视图3位置），使视场光阑边缘清晰;5）调节聚光器对中旋钮，使其居中；6）放大视场光阑，使其刚刚外切于视野。（二）汞灯电源的注意事项1）电源打开以后，大约 10分钟
9、左右光源达到稳定状态；2） 电源关闭以后，至少要等10分钟才能重新打开。（三）物镜盖玻片矫正环的调节方法1）调焦，使图像相对最清楚；2）把矫正环向一个方向转动一定角度，此时图像变模糊， 调焦，使图像相对最清楚；i Kiilhi3）判断此时的图像质量是否有所改善。如有改善，则按照 该方向再旋转一定角度；如质量下降，则反方向旋转；4）重复2）和3）直到图像质量改善之后又有所下降； 反方向旋转，回到倒数第二次的位置即可。（四） Ti-E物镜，DIC插片，DIC棱镜对照表ObjectiveDIC SliderN1/N2Plan flour 10x10 xN1Pla n Apo 20 x20 xN2Pl
10、a n Apo 40 x40 x IN2Pla n Apo VC 60 x60 x IN2Apo TIRF 100 x100 xN24. XY图像拍摄界面调岀方式:软件灰色空白处，鼠标右击菜单中选择 Acquisition Controls -> Alplus Settings激光解锁按钮j可匚Pg1浏览拍摄针孔调节扫描参数透射通道切换荧光通道调节透射通道调节缩放调节尼康A1共聚焦培训指引#尼康A1共聚焦培训指引114.1拍摄流程(1) 点击Laser InterLocked按钮，解除闪烁状态，使激光可以通过软件起振(2) 选择要使用的激光/通道。(3) 要同时获取共聚焦图像和透射图像时
11、，点击TD IN按钮，并勾选 TD的勾选框。(4) 在Pinhole的项目中选择要使用的激光波长。点击 Home按钮，选择与物镜最匹配的针孔尺寸。(5) 点击Live按钮，边观察图像边调节激光功率和检测器的灵敏度HV。HV：探测器灵敏度Offset:信号的偏移(标准：0)Laser激光功率(6) 将像素数调整为所需要的分辨率。(512X512等)图像较暗时，请降低扫描速度。(7) 根据需要进行Average。(8) 点击XY按钮以获取图像。激活要保存的图像，从菜单栏中选择File-Save As以进行保存尼康A1共聚焦培训指引124.2图像显示调节尼康A1共聚焦培训指引#尼康A1共聚焦培训指引
12、13点击显示方式LUTS空制扫描区域控件开关通道标签状态栏LUTs窗 口进行细致的图像显示调节按钮调岀自动调节饱和指示状态栏通过拖拽调节图像亮度.4.3扫描区域调节AlpluiS- Scanm |点击Scan Area窗口 ESI按钮，用鼠标拖动绿色边框，以缩小扫描区域。在鼠标变为十字箭头的状态下移动边框，鼠标右击以决定扫描的位置。可在Zoom中确认缩放倍率。在绿色边框的旋转用点上拖动鼠标，可以 进行扫描区域的旋转。在Rotation中可以确认所设定的旋转角度。旋转范围为-90度90度。缩放区域点右键后，边框变绿，表示区域 选定。RE Erfl冒直閒Dwel UW：Ptxd &2B：
13、0.25 pm OpbcaJ resdbjtxxr： Q.K) pmZ step szie: O.SOum Cphcdl SKsmna 1.和 un软件灰色空白处，鼠标右击菜单中选择 Acquisition Controls -> A1plus Scan Area尼康A1共聚焦培训指引145. XYZ三维图像拍摄5.1拍摄流程点击XYZ按钮，启动 Capture Z Series对话框(如下图)尼康A1共聚焦培训指引#尼康A1共聚焦培训指引#点击西Defined top & bottom按钮尼康A1共聚焦培训指引#尼康A1共聚焦培训指引15，点击，点击点击 5?刮Reset按钮
14、Live按钮，边观察图像边转动显微镜的调焦手轮(微调模式)Top按钮，决定Top。Live按钮，边观察图像边转动显微镜的调焦手轮(微调模式)CuLui" Bottom按钮，决定 Bottom(6)决定 Step(8) 根据需要，选择Save to File，在保存的同时获取图像。(9) 参照“ 4.1 ” 模式下设置拍摄参数。点击莓亦认Run now按钮，获取Z序列图像尼康A1共聚焦培训指引165.2三维图像后期处理尼康A1共聚焦培训指引#尼康A1共聚焦培训指引#(i)点击F”了，打开Z序列图像Show Volume View按钮，构筑三维图像点* _l|出S焜内X万IZ疋峯尼康A1
15、共聚焦培训指引#可对三维图像进行下列操作：缩放、旋转。改变渲染模式、渲染品质及显示比例 调节照明。整体切割，通道切割 5.3三维动画制作(1 )将事 Show Movie Maker按钮置于 ON。(2)点击巳Settings按钮，打开Movie Maker settings 对话框。=inz *rtm zw f kri 期 SE* ® * LZ， 0I1F a r l h»= w -指定播放时间(Movie Duration )和 播放速度(Frames per Second),点击OK按钮。(3)以插入关键帧的方式制作动画。(4)点击Create Movie按钮，创建3
16、4 店 M 1?« M?'上S3 SEffi 哉M«，门 T 312 E扁-CXOrrf尼康A1共聚焦培训指引#影像。尼康A1共聚焦培训指引#尼康A1共聚焦培训指引17(5 )选择已得到的旋转图像，从菜单栏中选择File -> Save As以进行保存尼康A1共聚焦培训指引#保存格式选择avi尼康A1共聚焦培训指引186. XYT时间序列图像拍摄(1) 点击 . XY Time按钮，启动 Capture Timelapse 对话框(2) 决定时间间隔(Interval)和持续时间(Duration)<(3) 选择Save to File，在保存的同时获取
17、图像。(4) 参照“4.1 ” Li模式下设置拍摄参数。 点击MmRun now按钮，获取时间序列图像尼康A1共聚焦培训指引196. 经时变化分析(1) 点击|厨，打开时间序列图像。(2) 鼠标右击软件上的灰色部分，从弹出的菜单中选择Analysis Controls -> Time Measurement 以调岀控件界面。二2:-E,=Tif rtrdiwvmiFnI' hr Nkaure Al > Heuwt _ Stop Ste# j 曲 卸 呼 I jj百无 冋 I 鳳 Bffrt *| lafliHtfiteljgfgRjM Mn*.- grJ S*t- Cfef
18、c- Hewwnient E H -5 I :GFBphEiBJS H £ J5 |£ I Hi-ISO-沖2bJ J#3rMdOKUTira |rmi尼康A1共聚焦培训指引#尼康A1共聚焦培训指引#nst runif'.arjp*l /MJ MWfcPJTEtrl：H*h土：!51.PKE)(3) 在图像上设定 ROI ( Region Of Interest)。1点击 肿沁.-.Define按钮，启动 Define ROI窗口2.在图像上设定RO。3点击 Qriih Finish按钮以结束设定。(4) 进行经时变化分析。1点击I HeaiW览Measure按钮，
19、绘制图表。2.以中任意一种测量模式进行分析。Multi ROIs:可以显示多个ROI的经时变化(每次只可选择1个通道)Multi Dyes:可以显示多个通道(ALL、Custom)的经时变化(每次只可选择 1个RO)3.点击凰Export，选择 Export Data，点击Export Export按钮，可以保存尼康A1共聚焦培训指引#尼康A1共聚焦培训指引#为文本数据。尼康A1共聚焦培训指引227. 多点时间序列图像拍摄(1) 点击 wt.ii- . XYZ Time 按钮，启动 ND Acquisition 对话框(2) 选择XY选项卡。(3) 操作电动载物台的摇杆，移动到要获取的点。(边
20、观察Live图像边移动会比较方便)(4) 点击Point Name，登录位置信息。如果选择Include Z，则Z位置也会被登录。可登录的有显微镜的Z位置或完美调焦系统的偏移值(要跟踪的焦点的位置)(5) 重复上述步骤(3)(4)，登录所需要的点。(6) 选择Time选项卡。 决定时间间隔(Interval)和持续时间(Duration )。(8) 选择Save to File，在保存的同时获取图像。(9) 参照“ 4.1 ” 模式下设置拍摄参数。(10) 点击呼共s new Run now按钮，获取多点时间序列图像。XYZ Overview面板提供高级载物台与Z轴控制功能软件灰色空白处，鼠标
21、右击菜单中选择 Acquisition Controls -> XYZ Overview8. 大图扫描(1) 从菜单栏中选择Acquire -> Scan Large Image,启动 Scan Large Image窗 口(2) 设定要扫描的范围。Scar> Lare jmaeapejfinOtxiaiairTf.; orwitP gKtr冗；| 3! 4a*ScurwmgQctefiCTnF.: njnenl曰MkMn 您亦 y巨 0W KSwr Etfer 如呷 rrgnpyRKu5口 Focus fT-anudy at star!Z£*iiM麼画CTE*ri«OMrt： jCnasFOH3F3r 4_ j ifiiZObwe;.a'1 yTl>ia kxw pw EN MtAcham ciplMseNm： D« FTTC.+ t X曹trtdiiwrjg曲snSt创即牌曲”.CtHK# CW- 0 D4FJr ETHOI ® Owrtapc l& 1%SVkN
(责任编辑：百科)